Ειδικές Μέθοδοι Ανάλυσης Κυτταρικών Διεργασιών

1. Λειτουργία κυτταρικών μεμβρανών- Ενεργότητα ΑΤΡασών (3 ώρες) --- Α. Παπαδάκη (ΕΔΙΠ)

Μελέτη της δράσης διαφόρων φυσικοχημικών παραγόντων στην λειτουργία των φυτικών κυτταρικών μεμβρανών, και στην ενεργότητα των ΑΤΡ-ασών ρίζας.

2. Προσδιορισμός υδατικού δυναμικού φυτικών κυττάρων (3 ώρες) --- Α. Παπαδάκη (ΕΔΙΠ)

Προσδιορισμός της τιμής του υδατικού δυναμικού κυττάρων πατάτας, με την χρήση διαλυμάτων διαβαθμισμένης συγκέντρωσης σακχαρόζης.

3. Ανοσολογικές Τεχνικές (3 ώρες) --- Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Δομή και τρόπος δράσης των ανοσοσφαιρινών IgG / Πειραματική διαδικασία αντίδρασης αντιγόνου-αντισώματος και παρατήρηση αποτελέσματος της αντίδρασης με την διαδικασία καθίζησης σε υγρή Φάση.

4. ELISA I: Ανοσοποιητικός προσδιορισμός συνδεδεμένος με ένζυμο (3 ώρες) --- Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Παρουσίαση 3 μεθόδων ELISA (συναγωνιστική, sandwich, έμμεση). Εικονικό πείραμα με την έμμεση μέθοδο ELISA / Αρχή πειραματικής διαδικασίας  για πραγματοποίηση sandwich ΕLISA

5. ELISA II: Μέθοδος sandwich ΕLISA για ποσοτική ανίχνευση αντιγόνου (3 ώρες) --- Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Ποσοτική ανίχνευση Chicken Gamma-Globulin [αντιγόνο: Chicken Gamma-Globulin, Lyophilized / 1ο αντίσωμα: Primary Antibody Rabbit Anti-Chicken, Lyophilized, 2ο αντίσωμα: Secondary Antibody (Goat Anti-Rabbit Antibody-HRP), Lyophilized, HRP Enzyme Substrate (TMB)]

6. Απομόνωση λεμφοκυττάρων από τη σπλήνα ποντικού (3 ώρες) --- Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Α. Απομόνωση κυττάρων από σπλήνα ποντικού, Β. Μέτρηση κυττάρων με χρήση αιμοκυτταρόμετρου, Γ. Μέτρηση ζωντανών και νεκρών κυττάρων με χρήση Trypan Blue, Δ. Διαχωρισμός λεμφοκυττάρων από ερυθρά κύτταρα με 2 τρόπους:  i) διαχωριστική φυγοκέντρηση και ii) λύση ερυθρών κυττάρων

7.  Μορφολογία λεμφικών και μυελικών κυττάρων (3 ώρες) ---  Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Α. Παρατήρηση μορφολογίας κυττάρων από σπλήνα ποντικού μετά από χρώση Giemsa και παρασκευασμάτων αίματος μετά από χρώση May-Grunwald-Giemsa. Β. Αναγνώριση τύπων κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος.

8. Κυτταρομετρία ροής (3 ώρες) --- Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Α. Διάκριση υποπληθυσμών Λευκών κυττάρων στον σπλήνα ποντικού (μακροφάγων, Τ λεμφοκυττάρων, Β λεμφοκυττάρων και κυττάρων που εκφράζουν τάξης ΙΙ αντιγόνα ιστοσυμβατότητας), με χρήση  Προγράμματος Υπολογιστικής Ανάλυσης δεδομένων από Κυτταρομετρία Ροής

Β. Υπολογισμός ποσοστού των παραπάνω υποπληθυσμών στον σπλήνα  

9. Παρατήρηση κυτταρικής διαίρεσης με μικροσκοπία φθορισμού (3 ώρες) - Ε. Κουιμτζόγλου (ΕΔΙΠ)

Μονιμοποίηση κυττάρων, blocking, επώαση με 1ο αντίσωμα, επώαση με 2ο αντίσωμα και  παρατήρηση σε μικροσκόπιο φθορισμού.

10. Διαμόλυνση κυτταρικής σειράς με πλασμιδιακό φορέα για την υπερέκφραση πρωτεΐνης (3 ώρες) [I. Κεκλίκογλου (ΔΕΠ)- Μ. Δραμουντάνη (ΕΤΕΠ)]

1) Σχεδιασμός συνθηκών για την υπερέκφραση πρωτεϊνης ενδιαφέροντος σε κύτταρα θηλαστικών.

2) Προετοιμασία μειγμάτων αντιδραστηρίων/πλασμιδίων για τη διαμόλυνση

3) Διαμόλυνση κυτταρικής σειράς με τη μέθοδο χλωριούχου ασβεστίου για την εισαγωγή εξωγενούς γενετικού υλικού (πλασμιδίου)

4) Απομόνωση ολικών πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων από κύτταρα θηλαστικών

11. Ανίχνευση πρωτεϊνών κατά Western (Western blotting)

(3 ώρες) [I. Κεκλίκογλου (ΔΕΠ) - Μ. Δραμουντάνη (ΕΤΕΠ)]

1) Ποσοτικοποίηση πρωτεϊνικής συγκέντρωσης σε εκχυλίσματα κυττάρων θηλαστικών

2) Προετοιμασία δειγμάτων για διαχωρισμό πρωτεϊνών 

3) Διαχωρισμός πρωτεϊνών με ηλεκτροφόρηση (SDS-PAGE) 

4) Μεταφορά πρωτεϊνών σε μεμβράνη 

5) Ανοσοαποτύπωση (immunoblotting) - ανίχνευση των υπό μελέτη πρωτεϊνών με χρήση ειδικών αντισωμάτων